Revision as of 04:06, 7 December 2025

组会汇报

2025年12月3-5日

制备TNF-SA-DNA

1.样品稀释：生物素化TNF-α储存液 (63.4KDa 1µM)：20 µg粉末溶于317 µLdd水，分装出5管30ul冻存

Azide-DNA储存液 (100 µM)：10 µL 1mM + 90 µL dd水分装出5管20ul冻存

DBCO-SA储存液 (100 µM)：将1 mg DBCO-SA冻干粉短暂离心。加入 149 µL 预冷dd水，分装出5管5ul冻存

2.反应1： 3ul DBCO-SA + 15ul Azide-DNA点击化学，室温孵育4h

3.10kda超滤管超滤除去游离DNA超滤至 30ul 得到10uM SA-DNA,留5ul验证

4.反应2： 25ul SA-DNA + 25ul 生物素化TNF-α，室温孵育30min

5.100kda超滤管超滤除去游离蛋白超滤至 50ul 得到0.5uM TNF-SA-DNA

6.Native Page

6.1 上样1 1 µM 生物素化TNF-α 5ul 稀释至 10ul，

上样2 100 µM DBCO-链霉亲和素 1ul 稀释至 100ul，再取5ul稀释至 10ul

上样3 10uM SA-DNA 5ul 稀释至 100ul

上样4 0.5uM TNF-SA-DNA 10ul

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              <p>1.样品稀释：生物素化TNF-α储存液 (63.4KDa 1µM)：20 µg粉末溶于317 µLdd水，分装出5管30ul冻存</p>
              <p>          Azide-DNA储存液 (100 µM)：10 µL 1mM + 90 µL dd水 分装出5管20ul冻存
-             <p> DBCO-链霉亲和素储存液 (100 µM)：将1 mg DBCO-SA冻干粉短暂离心。加入 149 µL 预冷dd水，分装出5管5ul冻存 <p>
+             <p> DBCO-SA储存液 (100 µM)：将1 mg DBCO-SA冻干粉短暂离心。加入 149 µL 预冷dd水，分装出5管5ul冻存 <p>
              <p>2.反应1：  3ul DBCO-SA + 15ul Azide-DNA点击化学，室温孵育4h<p>
              <p>3.10kda超滤管超滤除去游离DNA超滤至 30ul 得到10uM SA-DNA,留5ul验证<p>