XU1:2025/Dec

2025年12月3-5日

制备TNF-SA-DNA

1.样品稀释：生物素化TNF-α储存液 (63.4KDa 1µM)：20 µg粉末溶于317 µLdd水，分装出5管30ul冻存

Azide-DNA储存液 (100 µM)：10 µL 1mM + 90 µL dd水 分装出5管20ul冻存

DBCO-SA储存液 (100 µM)：将1 mg DBCO-SA冻干粉短暂离心。加入 149 µL 预冷dd水，分装出5管5ul冻存

2.反应1： 3ul DBCO-SA + 15ul Azide-DNA点击化学，室温孵育4h

3.10kda超滤管超滤除去游离DNA超滤至 30ul 得到10uM SA-DNA,留5ul验证

4.反应2： 25ul SA-DNA + 25ul 生物素化TNF-α，室温孵育30min

5.100kda超滤管超滤除去游离蛋白超滤至 50ul 得到0.5uM TNF-SA-DNA

6.Native Page

6.1 上样1 1 µM 生物素化TNF-α 5ul 稀释至 10ul，

上样2 100 µM DBCO-SA 1ul 稀释至 100ul，再取5ul稀释至 10ul

上样3 10uM SA-DNA 5ul 稀释至 100ul

上样4 0.5uM TNF-SA-DNA 10ul

2025年12月8日

蛋白验证

1.样品：生物素化TNF-α储存液 (63.4KDa 1µM)：1管25ul冻存

DBCO-SA储存液 (100 µM)：1管5ul冻存

2.Native Page

上样1 1 µM 生物素化TNF-α 10ul ，

上样2 1 µM 生物素化TNF-α 取5ul稀释至 10ul

上样3 100 µM DBCO-SA 1ul 稀释至 100ul （1µM DBCO-SA），上样10ul

上样4 1µM DBCO-SA 再取5ul稀释至 10ul

2025年12月9日

制备TNF-SA-DNA

1.样品稀释：生物素化TNF-α储存液 (63.4KDa 1µM)：10ul

Azide-DNA储存液 (100 µM)：1管20ul冻存

DBCO-SA储存液 (100 µM)：4ul冻存

2.反应1： 3ul DBCO-SA + 15ul Azide-DNA点击化学，冰上孵育5h

3.稀释至 30ul 得到10uM SA-DNA,留5ul验证

4.反应2： 10ul SA-DNA + 10ul 生物素化TNF-α，得到0.5uM TNF-SA-DNA冰上孵育1h

5.Native Page

6.1 上样1 1 µM 生物素化TNF-α 5ul 稀释至 10ul，

上样2 100 µM DBCO-SA 1ul 稀释至 100ul，再取5ul稀释至 10ul

上样3 10uM SA-DNA 5ul 稀释至 100ul

上样4 0.5uM TNF-SA-DNA 10ul