XIE/2:2026/Jan: Difference between revisions
(Created page with "==1.13== ===抗体还原=== *取2 ul(1mM) TCEP,用PBS(7.4)稀释至 20 ul(100uM),取5 ul稀释后的TCEP，加入85 ul PBS(7.40)，涡旋混匀---TCEP溶液pH过低提前中和 *取2 ul(50uM)抗体，用PBS（pH 7.4）稀释至10 ul（10uM），将TECP的PBS缓冲液加入其中，37℃孵育2h. *取1 ul(50uM)抗体，用PBS（pH7.4）稀释至8 ul，作为 C 组 ==偶联=== *将孵育好的溶液用1XPBS(6.5)洗涤4次（10000g 3.5min），均分样品（A.B）----buffe...") |
No edit summary |
||
| Line 1: | Line 1: | ||
<div style="color: black !important; font-family: 'Times New Roman', SimSun, serif !important, line-height:1.5;"> | |||
==1.13== | ==1.13== | ||
===抗体还原=== | ===抗体还原=== | ||
Revision as of 14:35, 13 January 2026
1.13
抗体还原
- 取2 ul(1mM) TCEP,用PBS(7.4)稀释至 20 ul(100uM),取5 ul稀释后的TCEP，加入85 ul PBS(7.40)，涡旋混匀---TCEP溶液pH过低提前中和
- 取2 ul(50uM)抗体，用PBS（pH 7.4）稀释至10 ul（10uM），将TECP的PBS缓冲液加入其中，37℃孵育2h.
- 取1 ul(50uM)抗体，用PBS（pH7.4）稀释至8 ul，作为 C 组
偶联=
- 将孵育好的溶液用1XPBS(6.5)洗涤4次（10000g 3.5min），均分样品（A.B）----buffer pH 6.5避免后续加入的Mal被水解（碱性易水解）
- A（共混组）：向 A 中加入5 ul(100uM)的Mal-PEg-DBCO 和 1 ul(1mM)Azide-ssDNA，室温避光孵育4h.
- B（依次组）：1）向 B 中加入5 ul(100uM)的Mal-PEg-DBCO，室温避光孵育2h.2)孵育结束后，向其加入1 ul(1mM)Azide-ssDNA，室温避光孵育2h.
验证
- 强还原断开轻重链：向A、B、C中加入对应量的蛋白loudingbuffer，再各加入1 ulβ-巯基乙醇，100℃煮10min
- 10%SDS-Page.