XIE/Enzyme:2025/Nov: Difference between revisions
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分装于离心管（每管 '''30 μL'''，共 '''4 管'''），以及 EP 管（'''400 μL、600 μL、800 μL''' 各一管）。 | 分装于离心管（每管 '''30 μL'''，共 '''4 管'''），以及 EP 管（'''400 μL、600 μL、800 μL''' 各一管）。 | ||
取其中 30 ul 管，加入 '''90 mL PBS (1×, 5 μM)'''。 | 取其中 '''30 ul''' 管，加入 '''90 mL PBS (1×, 5 μM)'''。 | ||
取 '''100 μL''' 作为待反应液，剩余 '''20 μL''' 作为凝胶对照液。 | 取 '''100 μL''' 作为待反应液，剩余 '''20 μL''' 作为凝胶对照液。 | ||
Revision as of 09:30, 3 November 2025
日期 11.3
1. GDH
取 GDH 1.4 mg，溶解于 2 mL PBS (1×) 中，形成 20 μM 溶液。 分装于离心管（每管 30 μL，共 4 管），以及 EP 管（400 μL、600 μL、800 μL 各一管）。 取其中 30 ul 管，加入 90 mL PBS (1×, 5 μM)。 取 100 μL 作为待反应液，剩余 20 μL 作为凝胶对照液。
2. DBCO
称取 DBCO 5 mg，加入 50 μL DMF (100 mM) 溶解。 取 2 μL 稀释至 20 μL (10 mM)。
3. Oligo
分别向 Seq1、Seq2 中加入UP 水：
- Seq1: 124 μL (1 mM)
- Seq2: 79 μL (1 mM)
各分装离心管 3 支，每支 20 μL。
4.反应
- 取 DBCO 溶液(10 mM) 1 ul 加入待反应溶液，室温下，抽屉内避光孵育 5 h
- 加入 Seq1 (1 mM) 10 ul 于反应溶液中，抽屉中孵育过夜