XIE/Enzyme:2025/Nov: Difference between revisions

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=== 3. Oligo ===
=== 3. Oligo ===
分别向 '''Seq1'''、'''Seq2''' 中加入:  
分别向 '''Seq1'''、'''Seq2''' 中加入UP 水:  
* Seq1: '''124 μL'''
* Seq1: '''124 μL''' ''' (1 mM)'''
* Seq2: '''79 μL'''   
* Seq2: '''79 μL'''  ''' (1 mM)'''
再加入 '''UP 水 (1 mM)''',各分装离心管 3 支,每支 '''20 μL'''。
各分装离心管 3 支,每支 '''20 μL'''。


=== 4.反应 ===
=== 4.反应 ===
#取 '''DBCO 溶液(10 mM)''' '''1 ul''' 加入'''待反应溶液''',室温下,抽屉内避光孵育 5 h
#取 '''DBCO 溶液(10 mM)''' '''1 ul''' 加入'''待反应溶液''',室温下,抽屉内避光孵育 5 h
#加入 '''Seq1 (1 mM)''' '''10 ul''' 于反应溶液中,抽屉中孵育过夜
#加入 '''Seq1 (1 mM)''' '''10 ul''' 于反应溶液中,抽屉中孵育过夜

Revision as of 09:29, 3 November 2025

日期 11.3

1. GDH

GDH 1.4 mg,溶解于 2 mL PBS (1×) 中,形成 20 μM 溶液。 分装于离心管(每管 30 μL,共 4 管),以及 EP 管(400 μL、600 μL、800 μL 各一管)。 取其中一管,加入 90 mL PBS (1×, 5 μM)。 取 100 μL 作为待反应液,剩余 20 μL 作为凝胶对照液。

2. DBCO

称取 DBCO 5 mg,加入 50 μL DMF (100 mM) 溶解。 取 2 μL 稀释至 20 μL (10 mM)

3. Oligo

分别向 Seq1Seq2 中加入UP 水:

  • Seq1: 124 μL (1 mM)
  • Seq2: 79 μL (1 mM)

各分装离心管 3 支,每支 20 μL

4.反应

  1. DBCO 溶液(10 mM) 1 ul 加入待反应溶液,室温下,抽屉内避光孵育 5 h
  2. 加入 Seq1 (1 mM) 10 ul 于反应溶液中,抽屉中孵育过夜