XIE/Enzyme:2025/Nov

日期 11.3

1. GDH

取 GDH 1.4 mg，溶解于 2 mL PBS (1×) 中，形成 20 μM 溶液。 分装于离心管（每管 30 μL，共 4 管），以及 EP 管（400 μL、600 μL、800 μL 各一管）。 取其中 30 ul 管，加入 90 mL PBS (1×, 5 μM)。 取 100 μL 作为待反应液，剩余 20 μL 作为凝胶对照液。

2. DBCO

称取 DBCO 5 mg，加入 50 μL DMF (100 mM) 溶解。 取 2 μL 稀释至 20 μL (10 mM)。

3. Oligo

分别向 Seq1、Seq2 中加入UP 水：

• Seq1: 124 μL (1 mM)
• Seq2: 79 μL (1 mM)

各分装离心管 3 支，每支 20 μL。

4.反应

1. 取 DBCO 溶液(10 mM) 1 ul 加入待反应溶液，室温下，抽屉内避光孵育 5 h
2. 反应后的溶液，超滤离心 2000 转 3 min 25 ℃ , 吸取离心后上清液并稀释至 90 ul ，二次清洗液 90 ul
3. 加入 Seq1 (1 mM) 10 ul 于上清液中，抽屉中孵育过夜

日期 11.4

1. nativepage

• 制胶：配置胶液 1 X TBE 溶液
• 上样：上样前 吹去孔中杂质，上样 7 孔（Marker 纯蛋白液 样品液 超滤洗液 Marker 蛋白缓冲、蛋白缓冲）
• 跑胶：120 V

2. 考马斯亮蓝染色

1. 切取胶体，于培养皿中注入 10 ml 考马斯亮蓝 ，37 ℃ 摇床振摇 3 h
2. 吸出培养皿中的考马斯亮蓝溶液，置于 15 ml 离心管 4°存储备用；用 UP 水反复清洗胶体基底至原色。