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<div style="color: black !important; font-family: 'Times New Roman', SimSun, serif !important, line-height:1.5;">
== 日期 11.3 ==

=== 1. GDH ===
取 '''GDH 1.4 mg'''，溶解于 '''2 mL PBS (1×)''' 中，形成 '''20 μM''' 溶液。  
分装于离心管（每管 '''30 μL'''，共 '''4 管'''），以及 EP 管（'''400 μL、600 μL、800 μL''' 各一管）。  
取其中 '''30 ul''' 管，加入 '''90 mL PBS (1×, 5 μM)'''。  
取 '''100 μL''' 作为待反应液，剩余 '''20 μL''' 作为凝胶对照液。

=== 2. DBCO ===
称取 '''DBCO 5 mg'''，加入 '''50 μL DMF (100 mM)''' 溶解。  
取 '''2 μL''' 稀释至 '''20 μL (10 mM)'''。

=== 3. Oligo ===
分别向 '''Seq1'''、'''Seq2''' 中加入UP 水：  
* Seq1: '''124 μL''' ''' (1 mM)''' 
* Seq2: '''79 μL'''  ''' (1 mM)'''
各分装离心管 3 支，每支 '''20 μL'''。

=== 4.反应 ===
#取 '''DBCO 溶液(10 mM)''' '''1 ul''' 加入'''待反应溶液'''，室温下，抽屉内避光孵育 5 h
#反应后的溶液，超滤离心 '''2000 转 3 min 25 ℃ ''', 吸取离心后上清液并稀释至 90 ul ，二次清洗液 90 ul
#加入 '''Seq1 (1 mM)''' '''10 ul''' 于上清液中，抽屉中孵育过夜

== 日期 11.4 ==
[[File:Page1.jpg|thumb|600X]]
=== 1. nativepage ===
*制胶：配置'''胶液（浓度9%）''' '''1 X TBE 溶液'''
*上样：上样前 吹去孔中杂质，上样 7 孔'''（Marker、纯蛋白液、样品液、超滤洗液、Marker 、蛋白缓冲、蛋白缓冲）'''
*跑胶：'''120 V '''

=== 2. 考马斯亮蓝染色 ===
#切取胶体，于培养皿中注入''' 10 ml 考马斯亮蓝''' ，'''37 ℃ 摇床振摇 3 h'''
#吸出培养皿中的考马斯亮蓝溶液，置于 15 ml 离心管 4°存储备用；'''用 UP 水反复清洗胶体基底至原色'''。

<span style="color:red;">
'''<big>总结</big>  1. 超滤时间过短，未有滤液   2. TBE 溶液 未调 PH   3. 用枪混乱，量不准'''

<div style="color: black !important; font-family: 'Times New Roman', SimSun, serif !important, line-height:1.5;">

== 日期 11.5 ==

* '''S1-GDH 杂交——超滤与否'''
#反应1：取 '''30 ul GDH '''溶液，加入 '''PBS 90 ul'''稀释, 取 '''100 ul 加入 1 ul DBCO''' 反应，剩余作为 '''对照 1''' 避光孵育
#将样品平均分为两份（'''超滤组、未滤组'''），超滤组 12000 转 20 min
#反应2：分别向以上两组样品中各加入 5 ul S1 避光孵育过夜
*''' S1-GDH 杂交——中间体验证'''
#反应1：取 '''30 ul GDH '''溶液，加入 '''PBS 90 ul'''稀释, 取 '''100 ul 加入 1 ul DBCO''' 反应，剩余作为 ''对照 2''' 避光孵育4 h
#中产物：，样品 '''12000 转 20 min '''超滤 ，保留样品 '''20 ul'''作为 '''中间产物'''对照
#反应2：吸出超滤液，少量多次清洗滤管，收集清洗液并保持体积为''' 80 ul '''，'''加入 S1 8 ul '''孵育过夜

==日期 11.6==

*'''Native page 验证'''
#配置'''胶液（浓度7.5%-Acr 2 ml）'''、'''1X TEB 1.5 L'''溶液
#跑胶 120 V 8 孔'''（对照1、未滤组、超滤组、Marker 、Marker、对照2、中间产物、样品'''）
#考马斯亮蓝染色
[[File:25_11_6_GDH_S1.jpg|thumb|center|400X]]

==日期 11.10==

*'''RuCHMO - S2 '''
#稀释''' RuCHMO ''':取'''RuCHMO'''原液 100 ul，用'''PB Buffer'''稀释至 '''564 ul'''(5 uM),分至 4 管 每管'''140 ul'''
#反应 1：取 1 管 RuCHMO ,吸取 ''''100 ul''' ，加入 '''1 ul DBCO '''溶液.剩余作为空白对照，在'''4℃，冰浴条件下孵育 4 h''' 
#超滤 ：'''4℃ 12000 转 超滤 20 min ''',清洗并稀释至 '''90 ul'''
#反应 2：向样品溶液中加入 '''10 ul S2''',''' 4℃ 冰浴 过夜'''

==日期 11.11==

*'''Native page 验证'''
#配置'''胶液（浓度7.5%-Acr 2 ml）'''、'''1X TEB 1.5 L'''溶液
#跑胶 120 V 5 孔'''（Marker、样品、对照1、对照2 、Marker'''）
#考马斯亮蓝染色
[[File:RuCHMO_S2_11_11.jpg|thumb|center|200X|11.11]]

==日期 11.12==

*'''RuCHMO - S2 '''
#反应 1：取 1 管 RuCHMO ,吸取 ''''100 ul''' ，加入 '''1 ul DBCO '''溶液.剩余作为空白对照，在'''4℃，冰浴条件下孵育 4 h''' 
#超滤 ：'''4℃ 12000 转 超滤 20 min ''',清洗并稀释至 '''100 ul'''，取 30 ul 保留作为 ''' 中间体对照'''
#反应 2：向剩余溶液中加入 '''10 ul S2''',''' 4℃ 冰浴 过夜'''

==日期 11.13==
*'''Native page 验证'''
#配置'''胶液（浓度7.5%-Acr 2 ml）'''、'''1X TEB 1.5 L'''溶液
#跑胶 120 V 5 孔'''（Marker、对照、样品、中间体 、Marker'''）
[[File:RuCHMO_S2_11_13.jpg|thumb|center|300x|11.13]]

== 日期 11.15==
*'''RuCHMO-S2 蛋白条带消失原因'''
#''' 分组 '''
=== PBS 缓冲组 ===
{| class="wikitable" style="text-align:center"
! -80° 保存 !! 常规对照 !! 未超滤组 || 未超滤组 || 超滤组 || 超滤组 
|-
!  ||  || 中间体 || 终产物 || 中间体 || 终产物
|-
| C1 || C2 || M1 || R1 || M2 || R2
|}

=== PB 缓冲组 ===
{| class="wikitable" style="text-align:center"
! -80° 保存 !! 常规对照 !! 未超滤组 ||未超滤组 || 超滤组 || 超滤组
|-
!  ||  || 中间体 || 终产物 || 中间体 || 终产物
|-
| C1' || C2' || M1' || R1' || M2' || R2'
|}
#稀释，采用'''PBS/PB两种buffer'''对照稀释，各保存两管 20 ul -80℃ 冻存 作为对照''' C1 C1''''
#反应1 各取 200 ul 加入 2 ul DBCO 进行反应，剩余各保留两管 20 ul 4° 冰浴保存作为对照'''C2 C2''''.4°冰浴孵育 4h
#超滤：反应后的溶液，分别一分为二（超滤组、未超滤组），超滤组 4° 12000转 20min
#反应：超滤组将超滤后的溶液一分为二，分别为'''M2 R2'''和'''M2' R2''''(R组加入 5 ul S2 进行反应)；未超滤组再一分为二，分别为'''M1 R1'''和'''M1' R1''''（R组加入 5 ul S2进行反应）4°冰浴孵育 4h

=== 凝胶迁移验证 ===
*nativepage：浓度 7.5%
*电压：120V
*染色：考马斯亮蓝
== 11.25 ==
=== Staples ===
*未修饰 六棱柱（HR）Staples 各取10 ul 混合（500nM）
=== Scaffold===
*Scaffold 冻干粉末 3 ml UP 水溶解（150nM）
=== Origami 折叠===
*25 ul Staples + 10 ul Scaffold + 10 ul 10X PBS + 55 ul UP水
*PCR 程序（80 ℃ 5min , 80 ℃ 逐渐降温至 60 ℃ 20 min , 60 ℃ 缓慢降温至 24℃ 14 h ,4 ℃ 保存）

== 11.26 ==
=== 样品纯化 ===
*取100 ul 样品中 5 ul作为'''未纯化样品组'''，剩余样品置于 100 K超滤管中，加 1X PBS 至500 ul，8000 g 超滤 1.5 min,补足 PBS 至 500 ul，反复纯化3次.纯化结束后，保持体积约为 100 ul 冲洗管壁，倒扣超滤管，离心收集.
===  琼脂糖凝胶电泳 1 ===
[[File:25_11_26_1.png|thumb|center|Unmodified Origami]]
*2 g 琼脂糖加至 100 ml 1X TBE，加热溶解并搅拌至透明，取出放凉至不烫手，再加入 Goldview 10 ul.倒入模具板等待成型
*上样 6 ul(5+1):Marker、Scaffold、未纯化组、纯化组、Marker. 1X TBE 90 v 90 min
*显影

=== 琼脂糖凝胶电泳 2 ===
[[File:25_11_26_2.png|thumb|center|Scaffold]]
*2.4 g 琼脂糖加至 120 ml 0.5X TBE，加热溶解，0.5X TBE 补足 120 ml，放凉至不烫手，加入 Goldview 12 ul，1.2 ml 1 M MgCl2 ,倒入模具板等待成型
* 上样 6 ul(5+1):Marker、1X Scaffold、2X Scaffold、1X Scaffold (80℃ 5 min)、2X Scaffold（80℃ 5min）、Marker. 0.5X TBE 90V 120 min
== 11.27 ==
===琼脂糖凝胶电泳 ===
*制胶
#配方：2.4 g Agarose; 120 ml 0.5X TBE
#微波炉加热溶解，稍冷，0.5X TBE 补足，加入 1.2 ml 1M MgCl2 和 12 ul Goldview
#插入梳子，待冷却成型
*制样
#Origami(15 nM):Louding = 5:1
#Scaffold： 取1 ul Scaffold 稀释至 10ul(15 nM),Scaffold:Louding = 5:1
*跑胶:90 V,120 min, 0.5X TBE
[[FIle:25_11_27.png|thumb|center|300px|Ori]]