Editing 蛋白提取及WB (section)

==备注==
#实验操作：
##制胶前用70%乙醇清洁并擦拭玻璃板，提前洗净烘干。
##内参一般不和样品同一块膜，单染方便抗体回收，只回收一抗，不回收二抗。一抗多为兔种属，二抗是抗兔的山羊抗，二抗基本只针对一抗的种属。抗体一般-20℃保存。
##对于悬浮cell或者出现悬浮现象的贴壁细胞，直接移液枪转移12孔板中cell培养液到ep管中，底部留存部分液态培养基用于刮板转移，离心2k rpm 3min，弃去上清，PBS重悬，n合1，再次离心，弃上清，清洗cell，重悬。加入细胞裂解液。
##制好的胶尽快使用，若需隔夜可将凝胶置于电泳缓冲液中过夜
##上层溶液左中右位点均匀加入
##该测定实验本身影响因素较多，所以n个重复合成一个样本进行SDS-PAGE，一组样本尽量一块凝胶进行分析。
##预实验可省略bca，根据细胞密度简单确定上样体积，使用内参(cell固定表达蛋白，且相对量较为固定）进行相对定量。常用内参：
###GAPDH，参与糖酵解的酶，37 kD
###β-Actin，广泛分布于各种组织中的肌动蛋白，42 kD
###实验室配制loading buffer：
###实验室配制试剂：

<table class="wikitable" style="margin: auto; border-collapse: collapse; border: 1px solid #a2a9b1;">
  <tr>
    <th colspan="2">Loading buffer上样缓冲液</th>
  </tr>
  <tr>
    <th>Reagent</th>
    <th>Quantity </th>
  </tr>
  <tr style="border-top: 1px solid #a2a9b1;">
    <td>Tris</td>
    <td>3.8 g</td>
  </tr>
  <tr>
    <td>10%SDS</td>
    <td>10 mL</td>
  </tr>
  <tr>
    <td>甘油</td>
    <td>10 mL</td>
  </tr>
  <tr>
    <td>溴酚蓝</td>
    <td>0.05 g</td>
  </tr>
  <tr>
    <td>UP水</td>
    <td>100 mL</td>   
</tr>
  <tr>
    <td>巯基乙醇</td>
    <td>临用前加入，巯基乙醇：与前述溶液按照=1：3混合</td>   
</tr>
</table>


<table class="wikitable" style="margin: auto; border-collapse: collapse; border: 1px solid #a2a9b1;">
    <tr>
      <th colspan="2">分离胶</th>
    </tr>
    <tr>
      <th>Reagent</th>
      <th>Quantity（5mL/板）</th>
    </tr>
    <tr>
      <td>H₂O</td>
      <td>1 mL</td>
    </tr>
    <tr>
      <td>30%Arc - Bis</td>
      <td>2 mL</td>
    </tr>
    <tr>
      <td>1 M Tris（pH 8.8）</td>
      <td>1.9 mL</td>
    </tr>
    <tr>
      <td>10% SDS</td>
      <td>0.05 mL</td>
    </tr>
    <tr>
      <td>10%过硫酸铵（APS）</td>
      <td>0.05 mL</td>
    </tr>
    <tr>
      <td>TEMED</td>
      <td>2 uL</td>
    </tr>
</table>


<table class="wikitable" style="margin: auto; border-collapse: collapse; border: 1px solid #a2a9b1;">
    <tr>
      <th colspan="2">浓缩胶</th>
    </tr>
    <tr>
      <th>Reagent</th>
      <th>Quantity（5mL/板）</th>
    </tr>
    <tr>
      <td>H₂O</td>
      <td>2.1 mL</td>
    </tr>
    <tr>
      <td>30%Arc - Bis</td>
      <td>0.5 mL</td>
    </tr>
    <tr>
      <td>1 M Tris（pH 6.8）</td>
      <td>0.38 mL</td>
    </tr>
    <tr>
      <td>10% SDS</td>
      <td>0.03 mL</td>
    </tr>
    <tr>
      <td>10%过硫酸铵（APS）</td>
      <td>0.03 mL</td>
    </tr>
    <tr>
      <td>TEMED</td>
      <td>3 uL</td>
    </tr>
</table>
*实验室制胶方法：先配制并灌注分离胶至绿边下缘1cm，均匀加UP水液封，静置1h直至分界线明显，配制浓缩胶，倒掉液封水，并用滤纸吸干，灌注浓缩胶，插入梳子，静置1h，拔下梳子并加缓冲液排气泡，静置30 min后再上样

#其他：
##该实验用于药效评估，药效前应当先做毒性实验
##细胞裂解液的成分：pmsf
##封闭液的组成：BSA或5%脱脂奶粉溶液
##实验室制胶：