Editing 常用细胞房操作 (section)

==12孔板CELL铺板（给药用）==
#细胞类型：肿瘤细胞(人源)（贴壁cell）
#操作
##取培养皿，弃去培养基，加入2ml PBS清洗，弃去
##加入2 mL胰酶，37 ℃消化2 min。
##加含血清培养基2 mL（终止胰酶消化），转移至EP管中，离心，弃去上清，
##加入培养基重悬，先向12孔板中每一孔加入0.5 mL含血清培养基，再添加0.5 mL cell重悬液（培养基）。先铺1孔，显微镜观察密度，根据需求调整重悬液或稀释液的体积。轻微晃匀，注明cell、操作、日期。
##37℃孵育过夜。过夜后，细胞密度达到70-80%时给药。
#备注：
##铺板前可以先在试管中混匀cell再铺板，更均匀。
##贴壁cell可通过增加培养基用量，给与更多营养物质，促进cell生长。但是培养基不能太多，会影响气体交换。可以12孔板 1ml变为1.5ml。
##胰酶消解时间取决于cell种类。过度消化会导致细胞膜蛋白损伤，影响细胞膜完整性和细胞贴壁；过度消化可能会使细胞聚集成团，需后续操作吹散，否则会影响细胞状态；过度消化会影响细胞表面受体的功能和完整性，从而影响细胞正常信号传导和功能表达。
##一般一皿长满的肿瘤细胞可铺3块板(6 12 24孔板)，但是96孔板周围一圈的只添加PBS，仅在中心的60个孔铺细胞，60孔共铺约1/10 or 1/12 or 1/15皿细胞。因为本次实验的人源细胞生长比较慢，所以一皿cell铺2.5块板
##贴壁cell给药前一晚需进行12孔板铺板，过夜，目的是为了让cell贴壁生长。
##无血清培养基-cell处于饥饿状态-自噬加强