Editing 细胞分选 (section)

== 操作 ==
#取组织：
##断颈处死小鼠，整体浸入含酒精的烧杯中灭菌3-5min；
##沿着腹部中线剪开取出脾脏，放入含PBS的6孔板中，转移至细胞房。
#研磨：
## 换用新的6孔板或50ml EP管（用于容纳筛网0.45μm）
## 加3mL的2%FBS-PBS，放入筛网和脾脏，用针筒芯研磨至无明显固体，转入灭菌EP管，离心2k rpm 3-5min，弃上清
## 加入5 mL红细胞裂解液，吹打混匀，冰上裂解5min
## 离心2krpm 3-5min，弃上清，加入2%FBS-PBS重悬。若仍有红色cell沉积可重复裂解
#分选：
## 取20μL细胞悬液计数（单位：cell/mL）
## 按分选试剂盒要求比例加入分选试剂，分离目标细胞
## 分选和未分选cell CD8抗体染色，流式，获得分选效率
#传代荧光及铺板（6孔板）：
## 取20μL细胞悬液计数
## 离心弃上清，用CFSE溶液（荧光染料）重悬细胞，静置2min
## 加入PBS终止染色，离心去上清
## 按1-2×10⁶ cell/孔（6孔板）加入含抗体（刺激T cell增长）培养基
## 显微镜确认细胞状态
#培养：
##37℃培养，显微镜观察。每24h观察一次cell状态，成功传代后应观察到成簇细胞。
#细胞流式
##分选前后取细胞悬液加CD8+抗体，用于流式测定T cell占比（评估分选效率）
##CFSE染色前后取细胞悬液，用于流式测定CFSE信号（作传代对照）
##传代72h后，流式，观察传代结果，传代结果例图：<br/>
[[File:CFSE荧光强度随细胞分裂递减.jpg|center|thumb|300px|CFSE荧光强度随细胞分裂递减]]